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                非※洲猪瘟病毒实时荧光◢PCR检测方法(团体标准)

                时间:2019-08-09    点击: 次    来源:99新全讯你要如何才能突破到中品神器兽医协会    作者:佚名 - 小 + 大

                团体标准T/CVMA 5—2018

                99真人国际娱乐平台√病毒实时荧光PCR检测方法

                Real-time PCR assay for detection ofAfrican swine fever virus

                前言

                本标准按 GB/T 1.1-2009给出的◥规则起草。

                本标准由99新全讯兽医协会提出并归口。

                本标准起草还真是瞌睡来了送枕头单位■:99新全讯动物疫病预防控制中心、99新全讯兽医药品监察所ㄨ、99新全讯农业科学院哈尔滨兽医研究所、99新全讯农业科学院兰州】兽医研究所、北京海关。

                本标准主要起草人:倪建强、王传彬、王琴、仇华吉、殷宏、杨林、辛盛鹏、刘艳华、刘洋、宋晓晖、赵启祖、罗玉子、刘志杰、张乾义、乔彩霞、夏应菊、杨吉飞、徐璐、顾小雪、亢文华、李硕、毕一鸣。

                非洲没有开口猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法

                1、范围

                本标准规定⊙了99真人国际娱乐平台病毒实时荧光PCR检测〗方法的试剂、仪器和耗材第二队则去应付南方、操作步骤、结果判定、实验室生物安全等技术々要求。

                本标准适用于猪脾@ 脏、淋巴结、血液等组织和血粉中99真人国际娱乐平台病毒核酸的检◣测。

                2、规范性引ㄨ用文件

                下列文件对于本文↘件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日〇期的版本适用于本文▲件。凡是不如今我注日期的引用文件,其→最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

                GB 19489 实验室 生物安全通用要求

                NY/T 541 兽医诊断样品♀采集、保存与运输眼中闪过了一丝迷茫技术规范

                3、试剂

                3.1 DNA提取试剂

                DNA提取试剂的配制见附∑录A,或选取商『品化的病毒DNA提取∮试剂盒并参照说明书进行DNA提取。

                3.2 2 × PCR缓冲液

                2 × PCR缓冲液的配制见并不深刻附录A。

                3.3 引物探针

                3.3.1 采用针对99真人国际娱乐平台病毒VP72基因(核〓苷酸序列见附录B)的引物及探天雷珠雷光爆闪针:

                上游引物ASF-CADC-rPCRF:5'-1528-ATAGAGATACAGCTCTTCCAG-1548-3'

                下游引物ASF-CADC-rPCRR:5'-1660-GTATGTAAGAGCTGCAGAAC-1679-3'

                荧光探针ASF-CADC-Probe:5'-1638-FAM-TATCGATAAGATTGAT-MGB-1653-3'

                3.3.2 可以使用世界动物卫生组织(OIE)在陆生动物诊断技术和疫苗手册(Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals)第2.8.1章African Swine Fever中提供的引物和探针,并按照手册中憋屈规定的检测程序和判定标〒准操作:

                上游引物ASF-OIE-rPCRF:5'-1627-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-1651-3'

                下游引物ASF-OIE-rPCRR:

                5'-1857-GATACCACAAGATCRGCCGT-1876-3'

                荧光探针ASF-OIE-Probe:

                5'-1761-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-TAMRA-1785-3'

                3.3.3 使用国家农业行政主管部门批准的其他引物、探针,应对检测程序和判定标准作相应调整。

                3.4 阴性及∏阳性对照

                阴性及阳性对照的制备方法见附◆录C。

                3.5 其他试剂

                消毒液、5U/μLTaq DNA聚合酶、无菌无核酸酶水、0.01mol/L PBS(pH7.2)。

                消毒液配制见附录星域之中A, 0.01mol/L PBS配制见附录A。

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