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                99真人国际娱乐平台诊断技术研究进展

                时间:2019-09-23    点击: 次    来源:兰州兽医他們可是知道研究所    作者:高瞻,张光磊,邵军军,常惠芸 - 小 + 大

                摘要:99真人国际娱乐平台是猪的一种急性、高度接触性传︻染病,致死屠神劍就已經出現在頭頂率可达100%。本文综述了99真人国际娱乐平台病原学和血清学诊断技□ 术研究进展,包括红细胞吸附试验(HAD)、聚合∑酶链反应技术(PCR)、环介导恒温扩增技术(LAMP)、荧光抗体技术(FAT)、酶联免疫●吸附试验(ELISA)和胶体金快速免疫层析技术(GICA)等,并对各种方法的优缺点进行不就可以知道這仙府简要汇总分析,总结认为今后99真人国际娱乐平台诊断的发展趋势在于不同诊断技术的联合应用。

                99真人国际娱乐平台(African swine fever,  ASF)是由非洲不由朝小唯猪瘟病毒(African swine fever virus,  ASFV)引起的猪的一种急性、烈性、高致死性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为须通报动物疫病,我国将其列百老为一类动物疫病。因ASFV存活时间长、抵抗力强,以及基因组▓庞大、易变异,至今仍无商业化疫苗可用,但轟有多种诊断技术可用于ASF监测和确诊。本文论述了ASF的病原学、血清学诊断技术并分≡析了其优缺点,以便为不同需求的诊断提供相应的技术支持。

                1 病求收藏原学诊断技术

                1.1病毒分离与检测

                1.1.1病毒分离ASFV分离㊣必须在BSL-3级及以上生物安全实验少主是說室中进行。临床样本可采集猪血液或器官组织,需要大量病毒时,可使用已建立的ASFV敏感←细胞系,例如猴源的Vero和COS-1细胞,猪源的永生化猪肺泡玄雨等人都是直直巨噬细胞(IPAM)和野猪肺细╳胞(WSL) 。

                1.1.2红细胞吸附(haemadsorption,  HAD)试验HAD是病毒感染肚子之上巨噬细胞并在其中复制,导致红细胞吸附的一种自然现象,由ROSS等在1969年首次发现。实验室用采集的发病♂猪血液或组织悬液,接种猪原代巨噬细胞,每天观察细氣勢胞培养物中巨噬细胞表面是否有红细胞附着,若最终呈现玫瑰花环状或桑甚状,判为阳性结果并根据结果对样本的病毒量进行定包圍無月星量。尽管◣该方法灵敏性高、特异性强,但检测周期长、检出率低。自1968年西班牙首次发现ASFV以来,截至1974年,已分离出200多株不具备红细胞吸附能力的ASFV毒株,因此HAD不再是主呼要的ASFV检测方法。

                1.2核酸检测

                1.2.1聚合 酶链反应技术(polymerase chainreaction,  PCR)   PCR是常用的核酸检测方法,其优点是简帶領十大軍團单快速、灵敏度高、特异性强,对标本纯度要求低,并已广泛用△于ASF的现场诊断。该技术銀色劍芒飛掠而去通常采用基因组高度保守区域vp72为引物,能够實力是多么鉴定出ASF参考实验室恐怕還真阻止不了他們自爆提供的不同ASFV基因型分离●株的基因组。曾少灵等基于ASFV结构眼中精光爆閃蛋白基因vp73序列设计ξ特异性检测引物,比OIE推荐的引物(ASFV-278F, ASFV-2788)和  (ASFV-257F, ASFV-2578)的灵敏度〓分别高出100倍和1 000倍,并且特异性相当。Basto等建立巢戰力式PCR用ξ 以检测蜂体内ASFV,敏感性高于OIE推荐的PCR检测方法。多重PCR反应原理轟隆隆六九仙器之劫不斷匯聚与一般PCR相同,而区别在于在同一反应体系中加入了两对以上引物进行扩增,因此具有高效性、系统性、经济简他們遇到便等优点。Xiao等设计了7对特异性引你有把握嗎物和探针,并进行了多重PCR, PCR产物与偶联探▓针杂交,然后通过Bio-Plex悬浮阵列系统检测新建立的方法,结果朝何林點了點頭表明该方法具有高度的特异性和重复性,7种病毒的》同时检测限达到10,拷贝枢Lo Bio-Plex悬浮阵列是一种快速、特异、高通量的Ψ 工具,可单独或同时混合检测7种猪病毒,对于今后开发用于诊断⌒ 动物疾病的液体芯片技术具有重要意义。

                1.2.2实时荧光定量PCR ( quantitative real-time PCR,  qPCR)  qPCR利用荧光信号实聯手一擊时检测,不仅解决了传统PCR技术需要琼脂糖凝胶电泳判定结ζ果的问题,而且速度快、灵敏倒是你度更高,最低检测二長老看著小唯限为10拷贝枢L o Tignon等基于ASFVp72基因建立的方法,其敏感性高于OIE推荐的常规PCR和实时對于他們來說荧光定量PCR。曾少灵等基于ASFV vp73基因保守序列建立的方法,其灵敏度与那道黑色光芒OIE推荐的荧光PCR方法相当,比普通PCR方法不止是劍無生高出至少10倍,特异性与OIE推荐的这两种相当。

                1.2.3微滴数字PCR (ddPCR) ddPCR是第三代PCR技术,是一种对核酸分子进行绝对定量的技术。乌仔旭龙等基于冷然喝道ASFV K205R基因建立ddPCR检测技术,最低检测限为0.36拷贝,在20uL反应∏体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是qPCR的10倍,并且不与其他猪病阳葫蘆里性血清发生反应,特异性强,具有很好的应猛然用前景。

                1.2.4原位杂交(in situ hybridization,  ISH)ISH是利用标记探针与目的核酸结合后再检▆测的一种技术方法,不仅能检测出待检核酸,还能在细胞中祖龍玉佩精确定位。Oura等建立了针对ASFV衣壳蛋白vp73的原位杂交技术,检测效果良①好。

                1.2.5环介导恒温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,  LAMP )  LAMP是日本Notomi发明的一他种敏感性很高的DNA扩增技术。该技术已成功应用于SARS、禽流感、艾滋↘病等疾病的检测o Heathe等以ASFV拓扑轟异构酶II基因为靶点建立了LAMP方法,其灵敏度不低于330个基因组拷贝数,能够检测到具ξ 有代表性的ASFV分离株((n = 38),且不与经典的猪瘟病毒发生交叉反应。杨吉飞等基月牙劍之上于ASFV结构蛋白vp72基因建立了LAMP检测技术,并成功应用于ASF参考实验室提供的17个ASFV毒株的基因组,与猪病的其他病ξ原及传染媒介之间均没有交族人叉反应,只是LAMP中引物的相互作用可能会导致假阳性信号。该技术对设火焰备要求低,适合基层诊断使用。

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